Pasażowanie komórek – technika stosowana w hodowli komórek somatycznych.

Ponieważ komórki dzielą się mitotycznie, dłuższy okres hodowli powoduje całkowite zapełnienie naczynia hodowlanego, zubożenie podłoża i – najczęściej – śmierć komórek. Pasażowanie polega na przeniesieniu komórek ze starego naczynia do nowych naczyń, zawierających świeżą pożywkę. Stosunek pasażowania mówi, w ilu nowych naczyniach umieszcza się komórki z jednego starego naczynia o tej samej powierzchni lub objętości (na przykład pasażowanie w stosunku 1:5). Pasażowanie linii komórkowych umożliwia hodowanie nowych pokoleń identycznych komórek praktycznie w nieskończoność.

Pasażowanie komórek zwierzęcych

Komórki zwierzęce hodowane są w laboratoriach w postaci zawiesinowej (komórki nieprzylegające, np. limfocyty) lub przylegającej (np. komórki śródbłonka).

Pasażowanie komórek zawiesinowych polega na ich zebraniu z naczynia hodowlanego, zwirowaniu przy przeciążeniu około 200 g (zwykle przez 5–10 minut), a następnie rozproszeniu w większej ilości pożywki i przeniesieniu do większej liczby naczyń hodowlanych.

Pasażowanie komórek przylegających zwane jest także trypsynizacją, gdyż stosuje się w tym celu enzym trypsynę, zwykle w stężeniu 0,25%. Trypsyna trawi białka błony komórkowej, którymi przyczepiają się one do dna i ścianek naczynia, dzięki czemu komórki przechodzą do zawiesiny. Ponieważ trypsyna trawi również białka błony niezbędne do życia komórek, po ich odczepieniu dodaje się pożywkę z inhibitorem trypsyny. Gdy komórki znajdą się w zawiesinie, postępuje się z nimi dalej tak, jak przy pasażowaniu komórek zawiesinowych. Po kilku lub kilkunastu godzinach od przeniesienia komórki ulegają ponownej adhezji do powierzchni naczyń.

This article is issued from Wikipedia. The text is licensed under Creative Commons - Attribution - Sharealike. Additional terms may apply for the media files.